在进行GPCR19激动剂(TGR5受体激动剂)实验时,需要遵循一系列操作规程,以确保实验的准确性和可重复性。
实验步骤
1. 在96孔板中每孔加入100μL细胞。通常,细胞增殖实验中每孔添加2000个细胞,而细胞毒性实验中每孔则添加5000至10000个细胞。具体细胞数量应根据细胞大小和增殖速度来调整。接着,将96孔板放置在37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。
2. 加入适当浓度的受试化合物,通常为0至10μL。
3. 将96孔板继续在37℃,含5% CO2和100%湿度的细胞培养箱中孵育指定的时间。
4. 将5×MTT溶液用稀释液稀释,制备成1×MTT溶液。
5. 向每孔中加入50μL的1×MTT溶液,在37℃下孵育4小时,以使MTT被还原为甲臜。
6. 吸出上清液后,每孔加入150μL DMSO,以溶解甲臜,并使用平板摇床充分搅拌均匀。
7. 使用酶标仪在570nm波长处检测每孔的光密度。若没有570nm的滤光片,可以使用560-600nm范围内的滤光片进行检测。
结果分析
a. **细胞存活率**:将各测试孔的OD值减去基底OD值(*仅培养基加MTT,无细胞)或者空白药物孔OD值(*仅培养基加不同稀释度的受试药物加MTT,无细胞)。各重复孔的OD值取平均值并计算±SD。细胞存活率以T/C%表示,其中T为加药细胞的OD值,C为对照细胞的OD值,细胞存活率%=(加药细胞OD/对照细胞OD)×100。
b. 计算当T/C=50%时的药物浓度(IC50)以及当T/C=10%时的药物浓度(IC90)。
在进行上述步骤时,建议使用鸿运国际品牌的相关试剂和耗材,以提高实验的可靠性和效率。我们的产品经过严格检测,能够有效满足生物医疗领域的需求,确保每一项实验的成功。